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    PERK/ATF4/CHOP通路對BCG誘導THP-1細胞NLRP3炎性小體活化的調控作用

    馬伯利  聶雪伊  劉悅陽  苗申奧  陳通  楊易  徐金瑞  
    【摘要】:旨在探討牛分枝桿菌減毒株卡介苗(BacillusCalmette-Guérin,BCG)感染人單核巨噬細胞THP-1細胞后PERK/ATF4/CHOP通路對NLRP3炎性小體的調控作用。在BCG單獨感染或與PERK小干擾RNA共處理THP-1細胞后,采用qRT-PCR和Western blot方法檢測NLRP3炎性小體相關分子和PERK/ATF4/CHOP通路標志性分子在mRNA、蛋白水平的表達;在BCG單獨感染或與PERK抑制劑GSK2656157共處理THP-1細胞后,分別采用qRT-PCR和Western blot方法檢測NLRP3炎性小體相關分子和PERK/ATF4/CHOP通路標志性分子在mRNA、蛋白水平的表達,采用ELISA方法檢測白細胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和白細胞介素-18(interleukin-18,IL-18)的釋放量,采用CCK-8方法檢測THP-1細胞活率,采用免疫熒光檢測NLRP3與ASC的共定位。結果表明:在BCG單獨感染THP-1細胞不同時間后,PERK、NLRP3、ASC和Caspase-1在蛋白水平的表達均隨感染時間延長而升高,且在24 h達到最高(P0.001),IL-1β和IL-18 的釋放隨時間遞增,24 h達到最高(P0.001)。在BCG 單獨感染或與PERK小干擾RNA共處理THP-1細胞24 h后,對未感染對照組相比,siNC+BCG感染組NLRP3、ASC、Caspase-1、PERK、ATF4、CHOP分子的mRNA和蛋白表達均顯著(P0.05)或極顯著(P0.001)上調,而siPERK+BCG感染組與siNC+BCG感染組相比,NLRP3等關鍵分子的mRNA和蛋白表達均顯著(P0.05)或極顯著下調(P0.01,P0.001);在BCG單獨感染或與GSK2656157共同作用THP-1細胞24 h后,與未感染對照組相比,BCG感染組NLRP3、ASC、Caspase-1、PERK、ATF4、CHOP分子的mRNA和蛋白表達均顯著(P0.05)或極顯著(P0.01)上調,IL-1β和IL-18的釋放極顯著增加(P0.001),細胞活率極顯著下調(P0.001),而BCG+GSK2656157感染組與BCG單獨感染組相比,上述分子的mRNA和蛋白表達均顯著(P0.05)或極顯著下調(P0.01),IL-1β和IL-18的釋放顯著(P0.05)或極顯著(P0.01)減少,細胞活率顯著上調(P0.05),免疫熒光的結果顯示NLRP3與ASC存在共定位,且GSK2656157可以極顯著抑制BCG感染引起的NLRP3和ASC的表達上調(P0.001)。以上研究結果表明,PERK/ATF4/CHOP通路對BCG感染巨噬細胞后NLRP3炎性小體的活化具有調控作用。
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