當藥苷調節興奮-收縮耦聯改善心肌缺血再灌注損傷的機制研究

【摘要】：目的：探索當藥苷通過興奮-收縮耦聯信號通路對缺血再灌注損傷后心臟收縮/舒張功能的影響。方法：24只健康雄性SD大鼠隨機分為正常組，模型組，10 μmol·L~(-1)當藥苷給藥組與1 μmol·L~(-1)地高辛給藥組，并采用Langendorff系統結合左前降支冠狀動脈結扎建立缺血再灌注損傷模型（I/R），TTC染色檢測各組心臟梗死面積，Powerlab生理記錄儀檢測血流動力學參數，如左心室舒張壓（LVDP）、左心室終末舒張壓（LVEDP）、左心室終末收縮壓（LVESP）、左心室內壓最大上升速率（+dp/dt_(max)）和左心室內壓最大下降速率（-dp/dt_(max)）；提取分離乳鼠原代心肌細胞（NRCMs），建立缺氧/復氧（H/R）損傷模型，隨機分為正常組，模型組，1 μmol·L~(-1)當藥苷給藥組和10 μmol·L~(-1)當藥苷給藥組，多功能成像細胞分析儀和激光共聚焦顯微鏡測定各組心肌細胞活力、心率、收縮幅度、收縮時程、達峰時程和舒張時程以及鈣瞬變峰值。根據前期轉錄組學測序結果以及文獻調研，利用實時熒光定量聚合酶鏈式反應（Real-time PCR）驗證L型鈣通道相關基因（Cacnb2），細胞色素c氧化酶相關基因（Cox6a2），肌鈣蛋白（Tnnc1、Tnni3、Tnnt2）、肌動蛋白（Actc1）、肌球蛋白（Myh6、Myl2、Myl4）等興奮-收縮耦聯通路基因的mRNA表達并對差異基因進行聚類分析。結果：與正常組相比，模型組心肌梗死面積增加（P0.01）、LVDP降低（P0.01）、LVEDP上升（P0.01）、LVESP下降（P0.05）、+dp/dt_(max)有下降趨勢和-dp/dt_(max)上升趨勢以及心肌細胞活力降低、心率降低、收縮幅度降低、收縮時程升高、達峰時程升高和舒張時程升高（P0.01），而當藥苷可以逆轉上述指標（P0.05）。此外，心肌細胞經H/R損傷后，Cacnb2、Cox6a2、Tnnc1、Tnni3、Tnnt2、Actc1、Myh6、Myl2、Myl4等興奮-收縮耦聯通路的基因表達下降（P0.05、P0.01）。而使用當藥苷預處理后，可以增強上述基因的表達（P0.05）。結論：當藥苷通過調節興奮-收縮耦聯信號通路，從而調節原代乳鼠心肌細胞內鈣離子水平，增強心肌收縮功能，對抗I/R損傷。